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荧光酶联免疫分析

荧光酶联免疫分析(ELFIA)利用具有潜在荧光的底物作为酶标抗体(或抗原),当此类底物被酶分解后,其产物可产生荧光,据此可以进行荧光酶联免疫分析。这种方法综合利用了酶联免疫技术中酶解产物测定所具有的累计放大性和荧光测量的高度敏感性,大大提高了分析方法的灵敏度。是目前应用较为广泛、发展比较迅速的一种分析手段。

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荧光酶联免疫分析法是基于酶标免疫试剂与荧光底物结合的一种分析方法。在酶免疫分析中引入荧光底物有两大优点,其一是与生色底物相比,酶检测的灵敏度得到了很大的改善,ELFIA是目前非放射免按分析方法中灵敏度最高的方法之一,其二是荧光分析法比分光光度法具有更宽的动态范围。荧光酶联免疫分析即在普通的酶免疫分析的基础上,只改用理想的酶的荧光底物代替生色底物就可提高分析的灵敏度和增宽测量范围,并可减少各种试剂及样品的用量,成为一种微量、灵敏的酶免疫分析。
? 应用荧光酶联免疫分析法主要是为了提高免疫分析的灵敏度。很长时间以来,酶免疫分析的灵敏度一直较低。酶免疫分析的灵敏度依赖于免疫反应制剂(主要指抗体)的特异性和亲和力、酶结合物的比活性(Specific?activity)及对酶反应产物的可检测限值。在抗体和酶系统已达到优化的条件下,对酶反应产物的检测能力就决定着分析的灵敏度。在酶免疫分析的早期及目前仍大量应用的、大多数的酶底物为生色底物,但早已有了荧光底物,如β-萘酚磷酸酯即可作为碱性磷酸酶(AP)的底物,产生荧光产物β-萘酚,实际上,荧光测定要比分光光度测定灵敏的多,分光光度测定的限值约为1.0 X 10-3μg/mL,而荧光测定的限值约为1.0 X 10-6μg/mL,如果应用激光激发,其灵敏度还可以提高,这是因为荧光测定是测定接近于零或很低的本底荧光水平的增加信号,而分光光度测定却是测定强透光信号吸光度的减少。荧光测定也增宽了测定的范围,而分光光度测定的吸光度变化范围却限定在0.001或0.012.0之间。当然,在大多数实际情况下,荧光测定的检测限值常受血清和其他生物样品中本底的影响。因此,实用的荧光免疫分析绝大多数为固相的非均相体系,通过洗涤最大限度地降低本底以提高灵敏度。

荧光酶联免疫分析法集中了荧光分析法和酶免疫分析法的优点。广泛应用于生物学、医学和药学等多个领域。近年来,荧光免疫技术在临床生化检验工作中的应用也日益广泛。20世纪70年代以来,在传统的荧光免疫显微技术的基础上,融合酶免疫测定技术的优点,发展建立了多种荧光免疫测定方法,用于检测血清和其他体液标本中的各种微量和超微量的物质,如某些特殊的血清()蛋白、澈素和药物等。此类方法具有特异性强、灵敏度高、适用于自动化测定,以及无放射性污染等优点,受到普遍重视。荧光酶联免疫分析法根据抗原抗体反应后,是否需要分离结合的与游离的酶标记物,分为非均相 (或异相)?和均相两种方法。